Studies on KEM1 Gene Controlling Mitotic Cell Division in Yeast: Molecular Cloning of a High Copy Suppressor (ROK1) of kem1

효모에서 세포분열을 조절하는 KEM1 유전자에 관한 연구: kemi의 High Copy Suppressor (ROK1) 클로닝

The KEM1 gene is known to affect microtubule and spindle pole body function during the cell division cycle in Saccharomjyces cerevisiae. To identify new genes with functions similar or related to those of KEM1, we isolated a high copy suppressor gene (ROK1) that suppresses the kem1 mutation when cloned on a high copy number plasmid but not on a low copy number plasmid. Two clones which suppress both the benomyl hypersensitivity and the $Kar^{-}$ enhancing phenotype of kem1 null mutation were isolated and were shown to have a 9.0 kb identical insert by restriction endonuclease analysis. The restriction map constructed indicates that this suppressor gene, ROK1 is not KEM1. Subcloning experiments suggest that the functional region of ROK1 is at least 3.0kb in size.

Saccharomjyces cerevisiae에서 KEM1 유전자는 세포분열시 microtubules과 spindle pole body 구조체의 새로운 기능에 관여하는 것으로 알려져 있다. KEM1과 유사하거나 연관이 있는 기능을 갖는 새로운 유전자들을 찾는 목적으로 kem1 돌연변이의 high copy suppressor 유전자, ROK1, 를 찾아냈다. ROK1은 high copy 플라스미드에 클로닝되었을 때 kem1을 suppression 하고, low copy 플라스미드에서는 suppression 하지 않는다. kem1 돌연변이의 benomyl에 대한 민감성과 Kar enhancing 표현서을 동시에 suppression 하는 두 개의 클론을 분리하였으며, 제한요소로 분석했을 때 9.0kb의 insert 를 지닌 동일한 클론이었다. 이 suppressor 유전자 ROK1의 제한지도를 작성하였고, 그 결과 KEM1 이 아닌 다른 유전자인 것으로 나타났다. Suncloning 실험으로 ROK1은 적어도 3.0kb의 기능부위를 갖음을 확인했다.