Studies on the Production of Antibody to Mouse Zona Pellucida and its Effect on the Fertilization of Mouse Eggs

생쥐卵子의 透明帶에 대한 抗體의 生産과 이 抗體가 受精에 미치는 影響

本 試驗은 受精初期段階에서 생쥐卵子 透明帶의 機能을 糾明하고 種特異的인 精子受容體의 存在 및 構造理解를 위한 基礎硏究로서 ICR 생쥐의 透明帶를 免疫原으로 하여 토끼에서 抗透明帶抗體를 生産하고 免疫分析法 및 生物學的 檢査法으로 生産된 抗體가 생쥐 透明帶에 特異性이 있음을 確認한 후 이 抗體가생쥐 未受精卵의 體外受精에 미치는 影響과 또 이 抗體를 생쥐에 受動免疫하였을 때 受精에 미치는 影響을 調査하였던 바 다음과 같은 結果를 얻었다. 1. 處理區로서 抗血淸을, 對照區로서 對照血淸을 卵子培養液에 各各 0.3~10%로 含有한 培養液에서 생쥐의 未受精卵을 2時間 培養한 後 觀察하였을 때 對照區 卵子들의 透明帶가 正常的인 形態를 나타내었던 反面에, 處理區의 卵子들은 모두 透明帶 表面에 뚜렷한 沈澱層을 나타내었다. 이어 對照區와 處理區의 卵子를 0.1% pronase가 含有된 培養液으로 옮긴 후 觀察하였을 때, 對照區 卵子들의 透明帶가 5~7分만에 完全히 融解한 反面에, 處理區에서는 2~3時間까지 殘存하였다. 2. 處理區와 對照區 卵子를 FITC-goat anti-rabbit IgG가 含有된 培養液에서 養液한 후 螢光顯微鏡下에서 觀察하였을 때 對照區에서 對照血淸을 10% 含有한 培養液에서 培養한 일부 卵子들의 透明帶에서 희미한 螢光이 나타났으나 血淸稀釋度가 增加함에 따라 전혀 螢光을 나타내지 않았던 反面에, 處理區에서는 抗血淸이 1 : 1,000으로 含有된 培養液에서 培養한 卵子의 透明帶에서도 강한 螢光이 나타났다. 3. 帶抗體를 抗原으로 하여 間接酵素免疫分析法을 實施하였을 때 抗血淸과 對照血淸이 PBS에 1 : 200까지 稀釋되었을 때의 O.D.價는 별다른 差異를 나타내지 않았으나 血淸의 稀釋度가 增加함에 따라 O.D.價가 有意한 差異를 나타냄으로써 透明帶에 特異性을 갖는 抗體임을 確認할 수 있었다. 4. 抗血淸과 對照血淸이 各各 0.3~10%까지 含有된 培養液으로 생쥐의 未受精卵을 豫備培養한 다음 體外受精을 實施하였을 때의 受精率은 對照區에서 77.7%~87.7%이었던 反面에, 處理區에서는 0~29.8%로서 抗透明帶抗體가 생쥐卵子의 體外受精을 完全히 또는 顯著히 抑制하였다. 그러나 抗血淸과 對照血淸이 各各 2.5~10%까지 含有된 培養液으로 透明帶를 除去한 未受精卵의 體外受精을 하였을 때의 受精率은 處理區와 對照區에서 各各 93.0~98.3% 및 93.3~94.3%로서 受精抑制現象을 나타내지 않았다. 5. 抗血淸과 正常血淸, 그리고 兩 血淸으로부터 protein A-affinity chromatography에 의해 分離한 immunoglubulin G를 各各 생쥐에 受動免疫하였을 때, 對照區로서 對照血淸을 0.1~0.3ml 또는 control IgG를 1~3ml 投與했을 때의 各各의 受精率이 80.4~90.2%, 82.2~94.4%이었던 反面에, 處理區로서 抗血淸을 0.3ml 또는 immune IgG를 3mg 投與한 생쥐에서는 完全한 受精抑制現象이 確認되었다.