Drect Interaction of Streptozotocin with TBA (thiobarbituric acid) in Lipid Peroxidation Analysis

Streptozotocin에 의한 lipid peroxidation 측정시 TBA법의 적합성에 관한 연구

This study was conducted to evaluate the usage of TBA method for the analysis of lipid peroxidation induced by streptozotocin. 5 mM streptozotocin and 1 % TBA alone showed the maximum peak at 309 nm and 358 nm respectively, although no peak was observed at 532 nm which was the wavelength to determine the absorbance for TBA method. When 5 mM streptozotocin was mixed together with 1 % TBA in vitro, new peaks at 439 nm and 532 nm had been detected, suggesting TBA did interact directly with streptozotocin forming new colored products. These results suggest that TBA method is not adequate for determination of lipid lperoxidation induced by streptozotocin.

Streptozotocin에 의한 적혈구의 막 lipid peroxidation 측정시 TBA법의 적합성에 관하여 검토하기 위하여 Streptozotocin와 TBA의 직접반응 여부를 연구하였다. 여러 농도의 Streptozotocin 와 20% RBC suspension을 함께 배양한 후 lipid peroxidation을 TBA법으로 측정했을 때, Streptozotocin의 농도에 따라 흡광도가 증가하다가 100mM부터는 plateau를 이루었다. 그런데 적혈구를 제거한 대조실험에서도 발색단이 관찰되었다. 시험관에서 5mM의 Streptozotocin와 1% TBA를 산성조건에서 가열 직접 반응시킨 후 spectrum을 찍은 결과 TBA법 측정파장인 532nm에서 새로운 peak가 생겼다. 또 이 파장에서의 흡광도는 Streptozotocin 농도에 따라 증가하다가 25mM부터는 plateau가 되었다. 이러한 결과들은 적혈구와 Streptozotocin를 함께 배양하여 lipid peroxidation을 측정할 때, cell 내로 유입된 Streptozotocin 가 TBA와 직접반응을 할 수 있음을 제시한다. 그리고 다른 측정법인 lipid conjugation은 233nm에서의 흡수를 측정하는데. Streptozotocin 자체가 200-300nm에서 흡수를 나타내므로 이 방법으로도 lipid peroxidation 측정을 방해할 수 있다. 따라서 Streptozotocin에 의한 적혈구막의 lipid peroxidation은 TBA method 및 lipid conjugation 방법으로 측정하기는 부적합한 것으로 사료된다.