Effect of Potassium Chloride on the Separation and Purification of Model Proteins using Counter Current Distribution

역류분배에 의한 모델단백질의 분리정제시 염화칼륨의 영향에 관한 연구

The changes in the partition coefficient of model proteins (lysozyme, myoglobin, conalbumin, bovine serum albumin) in an aqueous two·phase system formed by polyethylene glycol and dextran were examined in order to improve the capacity of counter current distribution (CCD) for the protein fractionation and concentration . The protein distribution pattern in CCD with 30 tubes varied with the pH (4.5, 5.5, 6.5, 9.0, 12.0) and KCl concentration (0mM, 50mM, 250mM, 500mM) of the system. From the mixture of model proteins, pure myoglobin was appeared at the upperphase of 14th tube having 50mM of KCl at pH 5.5 and the upper-phase of 13th tube having 250mM of KCl at pH 6.5. Similarly pure BSA was obtained at the 14th tube having KCl 250mM with pH 4.5, pure lysozyme at the 19th tube having 500mM of KCl at pH 4.5 and the upper-phase of 16th tube 50mM of KCl at pH 5.5.

역류분배방법을 이용한 단백질의 분리정제 효율을 높이기 위하여, 4가지 모델단백질에 대하여 수용성액체 2상계에서의 분획계수를 KCl 농도와 pH변화에 따라 조사하였다. 또한, 역류분배방법을 이용한 다중분배 추출방식으로 모델단백질의 혼합물을 KCl 농도(0, 50, 250, 500mM)와 pH(4.5, 5.5, 6.5, 9.0, 12.0)를 달리한 20가지 조건에서 분획하였다. 그 결과 KCl 농도와 pH에 따라 단백질들의 분획계수(K)값이 다르게 나타나서, KCl을 첨가함으로서 역류분배방법을 이용한 단백질 분리효율을 향상시킬 수 있는 가능성을 보여 주었다. 단백질에 따라 분리가 잘 일어나는 KCl 농도와 pH는 다르게 나타나서 myoglobin의 경우 KCl 50mM, pH5.5조건의 14번 튜브 상층부와 KCl 250mM, pH6.5조건의 13번 튜브의 상층부에서 잘 분리가 되었으며, BSA의 경우는 KCl 250mM, pH4.5 조건의 14번 튜브에서 분리되었고, lysozyme의 경우는 KCl 50MM, pH4.5조건의 19번 튜브와 KCl 50mM, pH5.5의 16번 튜브 상층부에서 분리가 되었다.