Production of Monoclonal Antibodies by Hybridomas Sensitized to Sporozoites of Cryptosporidium parvum

Cryptosporidium parvum Sporozoites 에 감작된 Hybridomas 에서의 Monoclonal Antibody 생산

Hybridoma cell lines, which secrete monoclonal antibodies (mAbs) against the surface antigens of Cryptosporidium parvum Sporozoites, were produced by fusing spleen cells of C. parvum Sporozoite-immunized mice with P3-X63-Ag8 myeloma cells. Two cloned antibody-secreting cell lines, Kor1 and Ea2, were established and produced IgG1 and IgG2a antibodies, respectively. Percoll-purified sporozoites were solubilized and separated by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis. Western blot assay demonstrates that an antigen of 20-kDa was bound by monoclonals. By indirect immunofluorescence microscopy, mAb exhibited uniform binding to the sporozoite surface.

AIDS 환자의 치명적인 2차 감염을 유발하는 Cryptosporidium parvum 의 Infective stage 인 sporozoites의 단일군 항체를 분리하였다. Oocysts를 효소처리하여 sporozoites를 excystation시킨 후 Isopycnic percoll gradients를 이용하여 sporozoites를 순수분리한 후 단일군 항체 생산을 위한 항원으로 사용하였다. 두 달된 BALB/c 쥐를 immunize한 후 splenocytes와 P3-X63-Ag8 myeloma cells를 융합시킨 후 hybridoma 기술을 이용해 Kor1(IgGl), Ea2(Ig2a) 두 clones을 분리하였으며 정제된 sporozoites를 SDS-PAGE로 분리한 후 Western blot을 이용하여 단일군 항체 Kor1과 Ea2는 20,000 daltons 크기의 항원을 인식하였다. Immunofluorescent assay에서 단일군 항체가 sporozoites 표면에 반응하는 것으로 보아 20-kDa 단백질 항원은 sporozoites 표면에 위치하는 항원으로 밝혀졌으며 C. parvum에 감염되었을 때 항체생성에 관여하는 중요 항원 중 하나일 것으로 추정되었다.