Isolation of Oligosporogenous (Spo-Cry+)Mutant Containing Relatively tow Hemolytic Activity in $\delta$-Endotoxin from Bacillus thuringiensig subsp, israelensis

Bacillus thuringiensig subsp, israelensis의 용혈성 약화 및 무포자 변이주의 분리

The isolate SPO 3, an oligosporogenous and crystalliferous mutant, which was isolated from Bacillus thuringiensig subsp, israelensis by heat treatment at 42$^{\circ}C$ for 24 hit. The $\delta$-endotoxin of the mutant had a relatively low hemolytic activity on human red blood cells; the $\delta$-endotoxin of the mutant had 25 times less hemolytic activity compared to that of wild strain. The loss of 28 KDa hemolytic protein subunit in $\delta$-endotoxin of the mutant was confirmed by means of double immunodiffusiori, immunoelectrophoresis, and SDS-PAGE.

Bti 균주를 배양하여 포자와 $\delta$-endotoxin의 복합물을 직접 field에 적용시키면 미생물 생태계에 변화를 초래할 가능성이 있으며, 배양 후 포자로부터 $\delta$-endotoxin만을 분리할 경우에는 대량생산을 위한 기술적인 어려움이 있다. 또한 $\delta$-endotoxin은 용혈성 단백질을 함유하고 있어 Bti 균주로부터 무포자이며 $\delta$-endotoxin을 생산하는 변이주의 분리와 아울러 $\delta$-endotoxin의 용혈성 인자의 제거 또는 약화를 시도하였다. 그 결과 Bti 균주를 열처리시켜 SPO3 (Spo$^-$ Cry$^+$) 변이주를 분리 선별하고, 그 $\delta$-endotoxin의 모기유충에 대한 LC$_{50}$ 및 응혈성을 조사해 본 결과 LC$_{50}$는 약 20배, 용혈성은 약 25배정도 야생주의 $\delta$-endotoxin에 비해 약화되었다. 이는 변이주의 $\delta$-endotoxin내에 28KDa 단백질의 소실에 기인된 것이라 생각되며, 이는 면역확산반응과 면역전기영동 및 SDS-PAGE에 의해 확인되었다.