Cloning of nif Gene Cluster from Klebsiella pneumoniae and Expression in Escherichia coli

Klebsiella pneumoniae의 nif Gene Cluster의 Cloning 및 Escherichia coli 에서의 발현

The chromosomal DNA of Klebsiella penumoniae KNF1 was partially digested with HindIII. pBR322 was completely digested with same enzyme with additional alkaline phosphatase treatment. Both DNA samples were ligated and transformed into E. coli KO60. Single coloneis of the transformed cells were isolated on N0free agar media. These colonies were ampicillin-resistant and tetracycline-sensitive. When the plasmids in transformants were cured, nitrogen-fixing activities were lost. Therefore, these transformants harbored recombinant plasmid including nif genes of K. pneumoniae. Nitrogenase activity of transformant was higher than or the same as that of K. pneumoniae KNF1.

한국산 Klebsiella pnelµnoniae KNFl의 chromosomal DNA를 Hind III로 부분소화하고 pBR 322도 같은 효소로 완전소화했다. 소화된 pBR 322 의 5'- 말단연산기를 제거하여 두 DNA 표품을 ligation 한 후 E. coli K060 으로 transformation 하 였다. 이러한 transformants중 N-free 한천배지에서 자라는 단일 colony을을 얻었으며, 이들은 모두 ampicillin에 대해 저 항성을 가지고 있었고 tetracycline에 대해 저항성이 없었으며 cunng 되였을 때는 질소고정능을 잃었다. 이런 사실로부터 이 transformants가 K. pneumoniae의 질소고정능 유전자을 포함하는 recombinant plasmid를 가지고 있음을 확인할 수 있었다. 이들 transformants의 nitrogenase 역가는 K. pneumoniae KNF 1보다 더 높았다.