친화성 고분자 유도체의 합성 및 단백질의 분리정제에 관한 연구 - p-Aminoanilinylsuccinyl-AH-Sepharose 4B의 합성 및 흰느타리버섯 중 단백질의 정제 -

Synthesis of Resin Derivatives and Purification of Protein - Synthesis of p-Aminoanilinylsuccinyl-AH-Sepharose 4B and Purification of Protein in Pleurotus cornucopiae -

흰느타리버섯 Pleurotus cornucopiae 중의 단백질을 선택적으로 분리 정제하기 위하여, 출발물질인 AH 4B와 숙신산 무수물을 반응시켜 SAH 4B를 얻은 다음 이에 P-PD을 반응시켜 P-ASAH 4B를 합성하여 친화성 크로마토그래피하였다. 1) SAH 4B겔 중의 succinyl기의 capacity는 겔 1ml당 $9.0{\mu}mol$이었으며, p-ASAH 4B 겔 중의 p-aminoanilinyl기의 capacity는 겔 1ml당 $6.1{\mu}mol$ 이었다. 2) 합성한 P-ASAH 4B겔에 친화성 있는 단백질의 총 겉보기 분자량은 167KD이었으며, 이는 37KD와 130KD단백질의 복합체 이었다. 출발물질인 AH 4B겔에 친화성 있는 단백질의 총 겉보기 분자량은 97.2KD이었으며, 이는 3.2KD, 31KD및 61KD단백질의 복합체 이었다. 3) 합성한 P-ASAH 4B겔에 친화성이 있는 단백질 중의 아미노산 함량은 비극성 아미노산이 44.57%, 극성 아미노산이 24.75%, 양성 아미노산이 21.25% 및 음성 아미노산이 9.43%였고, AH 4B겔에 친화성이 있는 단백질 중의 아미노산 함량은 비극성 아미노산이 44.05%, 극성 아미노산이 29.13%, 양성 아미노산이 13.91% 및 음성 아미노산이 12.91%로 차이가 있었다. 4) 합성한 P-ASAH 4B겔 중의 p-amino-anilinyl기가 AH 4B겔 중의 아미노기보다 양전하를 가진 아미노산을 더 많이 함유하는 단백질을 선택적으로 분리하였다.

For selective purification of proteins in Pleurotus cornucopiae, affinity chromatography was performed by p-aminoanilinylsuccinyl-AH-Sepharose 4B gel synthesized by treating p-phenylene diamine with succinyl-AH-Sepharose 4B, which was prepared by treating AH-Sepharose 4B with succinic anhydride. The capacity of p-aminoanilinyl ligand group was 6.1 micromole per milliliter of gel. Total apparent molecular weight of the affinity proteins eluted from the synthesized gel was 167 KD, which were a protein complex of 130 KD and 37 KD. The contents of the nonpolar, polar, positively and/or negatively charged amino acids in the affinity protein were 44.57%, 24.75%, 21.25%, and 9.43%, respectively. Total apparent molecular weight of the affinity proteins eluted from the AH-Sepharose 4B gel was 95.2 KD, which were a protein complex of 61 KD, 31 KD and 3.2 KD. The contents of the nonpolar, positively and/or negatively charged amino acids in the affinity protein by AH-Sepharose 4B gel were 44.05%, 29.13%, and 12.91% respectively.