Properties of Ascorbate-Oxidizing Enzyme Purified from Pleurotus ostreatus

Pleurotus ostreatus에서 분리한 아스콜빈산 산화효소의 특성

  • 황윤엽 (서울대학교 자연과학대학 미생물학과) ;
  • 김연란 (서울대학교 자연과학대학 미생물학과) ;
  • 강사욱 (서울대학교 자연과학대학 미생물학과)
  • Published : 1988.12.01

Abstract

Ascorbate oxidizing enzyme from the crude extract of Pleurotus ostreatus was purified by ammonium sulfate precipitation, preparative polyacrylamide gel electrophoresis, DEAE Sepharose CL-6B ion exchange chromatography and Sephadex G-150 gel filtration chromatography. The molecular weight of the enzyme estimated by Sephadex G-150 gel filtration chromatography was 140,000 and that of its subunit by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis 66,000. The optimum pH for the maximum activity of the enzyme was 5.2 and the isoelectric point of the enzyme was 6.0 Km values for L-ascorbic acid and D-isoascorbic acid were both 2.2.$\mu$M, which indicates that the enzyme has the asme affinity towards both substrates.

Pleuratus ostreatus로부터 ascorbate oxidizing enzyme을 황산암모늄 침전, preparative polyacrylamide gel 전기영동, DEAE Sepharose CL-6B 이온교환크로마토그라피, Sephadex G-150 gel 여과크로마토그라피의 단계를 거쳐 순수분리 하였다. 이 효소의 분자량은 gel 여과크로마토그라피에 의하여 140,000 정도로, 효소의 소단위 분자량은 SDS-polyacrylamide gel 전기영동에 의하여 66,000 정도로 추정되었다. Isoelectric focusing에 의하여 이 효소는 6.0의 등전점을 갖는 것으로 밝혀졌고, 최적반응온도는 $85^{\circ}C$ 정도, 최적반응 pH는 5.2 정도인 것으로 나타났다. 본 효소는 L-ascorbic acid와 D-isoascorbic acid에 대하여 동일한 친화도를 갖는 것으로 보이며, Km값은 두가지 기질에 대해 모두 2.2µM 이였다.

Keywords