Properties of Ascorbate-Oxidizing Enzyme Purified from Pleurotus ostreatus

Pleurotus ostreatus에서 분리한 아스콜빈산 산화효소의 특성

Ascorbate oxidizing enzyme from the crude extract of Pleurotus ostreatus was purified by ammonium sulfate precipitation, preparative polyacrylamide gel electrophoresis, DEAE Sepharose CL-6B ion exchange chromatography and Sephadex G-150 gel filtration chromatography. The molecular weight of the enzyme estimated by Sephadex G-150 gel filtration chromatography was 140,000 and that of its subunit by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis 66,000. The optimum pH for the maximum activity of the enzyme was 5.2 and the isoelectric point of the enzyme was 6.0 Km values for L-ascorbic acid and D-isoascorbic acid were both 2.2.$\mu$M, which indicates that the enzyme has the asme affinity towards both substrates.

Pleuratus ostreatus로부터 ascorbate oxidizing enzyme을 황산암모늄 침전, preparative polyacrylamide gel 전기영동, DEAE Sepharose CL-6B 이온교환크로마토그라피, Sephadex G-150 gel 여과크로마토그라피의 단계를 거쳐 순수분리 하였다. 이 효소의 분자량은 gel 여과크로마토그라피에 의하여 140,000 정도로, 효소의 소단위 분자량은 SDS-polyacrylamide gel 전기영동에 의하여 66,000 정도로 추정되었다. Isoelectric focusing에 의하여 이 효소는 6.0의 등전점을 갖는 것으로 밝혀졌고, 최적반응온도는 $85^{\circ}C$ 정도, 최적반응 pH는 5.2 정도인 것으로 나타났다. 본 효소는 L-ascorbic acid와 D-isoascorbic acid에 대하여 동일한 친화도를 갖는 것으로 보이며, Km값은 두가지 기질에 대해 모두 2.2µM 이였다.