Streptomyces mitakaensis의 원형질체 형성 및 재생조건 연구

Conditions of Protoplast Formation and Regeneration of Streptomyces mitakaensis

Streptomyces mitakaensis 균주의 원형질체 형성과 정상세포로의 재생에 관한 최적조건을 연구했다. S. mitakaensis 균주를 GBYN 배지(glycerol 20g, beef extract 5g, yeast extract 5g과 NaCl 5g, 증류수 1,000$m\ell$)에 glycine 0.5% 함유된 배지에서 대수증식 기말까지 배양한 뒤에 lysozyme(1mg/$m\ell$)을 35$^{\circ}C$에서 60분간 처리를 했을 때에 원형질체 형성은 최고치를 나타냈다. 정상세포로의 재생은 R2 평판배지에 원형질체를 접종한 후 10일이 됐을 때에 재생이 되는 것을 관찰했고, H2액체 배지에서는 3일 후에 재생되는 것을 관찰했다. 세포재생 비율은 0. 1% 정도였다.

The optimal conditions for the protoplast formation and regeneration of Streptomyces mitakaensis have been investigated. S. mitakaensis cells were converted to protoplast by treating with 0.1 mg/$m\ell$ of lysozyme in phosphate-tris buffer (pH 7.2) to the cells grown at the late logarithmic growth phase in the GBYN medium (gycerol 20g, beef extract 5g, yeast extract 5g, NaCl 5g in 1 liter of distilled water) contained 0.5% glycine. Cell regeneration from protoplast was accomplished in 10 days post inoculation on the R2 regeneration agar medium and at 3 days post inoculation on the H2 regeneration liquid medium. The efficiency of the regeneration was 0.l% in 3 days at 35$^{\circ}C$.