원형질체 융합에 의한 pseudomonas putida의 biparental clones의 형성과 성질

Properties of biparental clones formed by spheroplast fusion of pseudomonas putida

P. pulida KU218R-3와 P. Putida KU42엠 원형질체 혼합액에 PEG 6000을 처리하여 biparental형과 recombinant형의 융합체를 얻었다. Pseudomonasd의 원형질체가 융합하는 형태는 TEM으로 관찰하였고, 원형질 융합체의 선별은 항생제 내성을 유전적 지표로 하여 간접적인 방법으로 선별하였다. Pseudomonas의 원형질체 융합에는 40% (w / v) PEG 6000을 상온에서 10분간 처리하는 것이 가장 효과적이었으나 PEG를 처리하지 않은 실험구에서도 융합체가 4%의 빈도로 생성되므로 PEG의 효과는 절대적인 것이 아니었다. 생성된 융합체의 대부분은 biparental clone이었고 (10.4%), recombinant clone의 생성빈도 는 너무 낮았디 (0.12%). 또한 biparental clone의 대부분은 further propagation 증에 모균주의 형태로 분리되었고, 이 과정 에서 late recombinant플 생성하였다. biparental clone에 t얀해 rE'combinant clonE은 여러 셔1대 후에도 안정하였다.

Biparental clones and recombinant clones were obtained by spheroplast fusion of Pseudomonas putida KU218R-3 and P.putida KU428. Formation of the fusion product was the most effective when the Pseudomonas spheroplast mixture were treated with 40% plyethyleneglycol(PEG) 6000 for 10min at room temperature, The fusants which selected by indirect method were obtained at an average frequency of 10.8%. Most of the fusants were biparental clones (10.4%) and the recombinant clones were produced in low yield (0.42%). Fusants, at the frequency of 4% were obtained without PEG 6000, which shows that fusion is not strictly dependant on PEG. The stability of fusants were examined. Most of the biparental clones were segregated to parental form amd late recombinants were formed on further propagation of biparental clone but the recombinant clones were nery stable.