Solanum melongena var. fructualbo의 원형질체(原形質体) 유리(遊離) 및 배양(培養)

Protoplast Isolation and Culture of Mesophyll in Solanum melongena var. fructualbo

Solanum melongena var. fructualbo 품종(品種)을 이용(利用)해서 원형질체 유리(遊離)에 미치는 여러 가지 요인(要因)을 규명하여 원형질체를 배양(培養)하여 금후(今後) 유용(有用)한 체세포잡종식물의 획득(獲得)에 필요한 기초자료로 활용하고자 실험(實驗)하였다. CPW 무기염이 함유(含有)된 0.7M mannitol 용액(溶液)에 1시간(時間)동안 전처리(前處理)한 후(後) cellulase 1.5%, macerozyme 0.2%, mannitol 0.6M, MES 0.01M, BSA 0.2%, pH 6.3에서 4시간(時間) 배양(培養)한 것이 원형질체 수량(收量) 및 상태(狀態)가 가장 양호(良好)하였다. 수세용액내(水洗溶液內) mannitol 농도(濃度)는 0.7M에서, sucrose 농도(濃度)는 0.6M로 하여 ESSCC방법(方法)으로 회수(回收)하는 것이 건전하고 안정(安定)된 원형질체 대량획득(大量獲得)에 적합하였으며, 거의 최적조건을 이용(利用)하여 처리(處理)된 원형질체를 $2.5{\times}10^4/m{\ell}$의 밀도(密度)로 8P-KM배지(培地)에 배양(培養)했을 때 3~5일(日)부터 세포신장(細胞伸長)을 하였고, 그 이후(以後)부터 세포분열(細胞分裂)이 이루어져 10일(日) 후(後)부터 colony 형성(形成)이 관찰되었다.

The experiments were conducted to identify several factors affecting isolation and culture of mesophyll protoplasts in Solanum melongena var. fructualbo. Higher viable plotoplasts were obtained, when isolated in 1.5% macerozyme, 0.2% macerozyme, 0.6M mannitol, 0.01M MES, 0.2% BSA containing solution adjusted to pH 6.3 for 4 hours. One hour plasmolysis of the material before digestion of leaf tissue was effective for protoplast yield and viability. The method of washing and purification of crude protoplasts, ESS process with 0.7M mannitol and 0.6M sucrose solution. was the best way to get purified protoplasts with viability. As isolated protoplasts were cultured in 8P-KM medium at a density of $2.5{\times}10^4/ml$, the cells were enlarged after 3 to 5 days from culture, subsequently the cells were divided and resulted in colonies.