Assessment of Mycobacterial Viability by Fluorospectrophotometry

형광분광측정법에 의한 항산균의 생명력 평가

Viable potential of Mycobacterium smegmatis, a slow grower in vitro cultivation and of M. leprae, an obligate intracellular parasitic bacterium, which can not be cultured yet in vitro was assessed by fluorospectrophotometry. Bacterial cells in different numbers and under various physiological status were incubater with fluorescein diacetate(FDA). After an incubation of the bacterial preparations with FDA at specified conditions, amount of fluorescein inside bacteria was measured by a fluorospectrophotometer at 470nm and 510nm of excitation and emission wavelengths, respectively. Fluorounit given by such bacteria showed a correlation with assessment of viability of the same preparations made by other methods, such as optical density and colony forming units of M. smegmatis and intracellular ATP content of M. leprae. The possible use of fluorospectrophotometry in assessing viability or physiological potential of bacteria, particularly intracellular parasites and fastidious organisms to culture in vitro is discussed in relation to other methods.

나균(M. leprae)을 비롯한 항산균(mycobacterium)의 시험관내 생리력 또는 생명력평가법(in vitro assessment of physiological potential or viability)으로 형광분광측정법(fluorospectrophotometry)를 고안하였다. 균액을 비형광성의 fluorescein diacetate(FDA)로 처리, 균체의 생대사능에 의해 FDA로부터 유리된 체내 fluorescein 량을 Aminco-Bowman 형광분광기로 측정함으로 균체의 생리능을 fluorounit로 표기해 보았다. Fluorounit로 표기된 균체의 생명력을 균배양의 광학밀도(optical density, colony forming unit, 체내 ATP 량 intracellular ATP content)등으로 표기되는 항산균의 생명력고 비교 검토함으로 형광분광법에 의한 시험관내 항산균의 생명력 평가법의 적합성을 살펴보았다. 형광분광측정에 의한 생명도의 평가는 객관성을 띤 기기정량법으로 조작이 간단하고 신속하게 결과를 얻을 수 있어 시험관내 배양의 속도가 완만한 균이나(slow growing mycobacteria, I.e.M. lerpae, Listeriae sp)등의 생명력의 상대적 평가에 활용될 수 있다고 사료된다.