Bacillus thuringiensis의 내독소(內毒素)와 플라스미드의 분리에 관한 연구

Studies on the Isolation of δ-Endotoxin and Plasmids in Bacillus thuringiensis

Bacillus thuringiensis subspecies중 HD-1, HD-9, HD-73과 finitimus의 내독소와 플라스미드분리에 대하여 얻은 실험결과는 다음과 같다. 1. 밀도구배에 의한 ${\delta}$-내독소 정제는 NaBr, CsCl, Renografin-76으로 행하여 밀도구배 재료간 독소 수율은 Renografin-76>CsCl>NaBr순으로 독소와 아포의 분리가 양호하였고 그 순도는 약 98%정도였다. 2. 정제한 내독소는 SDS-PAGE, 현미경 관찰, 생물검정으로 조사하였고, SDS-PAGE에 의한 하위단위체의 분자량은 약 66,000과 130,000달돈 이었다. 3. 내독소의 결정단백질의 외부형태는 finitimus를 제외한 3균주는 모두 이중피라마드형이었다. 4. 담배나방 유충에 대한 살충실험 결과 $0.1{\mu}g/ml$의 내독소 농도에서 HD-1은 60%, HD-73은 100% 치사율을 보였다. 5. B. thuringiensis의 플라스미드 크기는 약 0.5~120Kb 정도였고 그 수는 HD-1, HD-9, HD-73에서 각각 12, 3, 11개 였고, finitimus 균주에는 플라스미드가 없었다.

Delta-endotoxin in Bacillus thuringiensis var. finitimus, HD-1, HD-9 and HD-73 strains were isolated by NaBr, CsCl and Renografin density gradients. The purity of the toxin was about 98%. The purified o-endotoxin was analyzed by SDS-PAGE, electron microscopic observation and bioassay. According to SDS-PAGE, the molecular weight of subunits of the o-endotoxin were about 66,000 and 130,000 daltons. The shapes of the crystal toxin observed by TEM except finitimus strain were bipyramidal. When the purified endotoxin was bioassayed against tobacco horn worm, the entomocidal activities ($1{\mu}g/ml$) of HD-1 and HD-73 strains were, respectively, 60% and 100% at nine days after treated. The molecular weights of the plasmids isolated from B. thuringiensis were various from 0.5 to 120 Kb. The numbers of plasmids in HD-1, HD-9 and HD-73 strains were 12, 3 and 11, respectively, but B. thuringiensis var. finitimus strain had no plasmid.