Rapid and Simple Method for Isolating Plasmid DNA from Lactic acid Bacteria

유산균 Plasmid DNA의 신속 간편한 분리방법

A simple procedure for rapid isolation of plasmid DNA from lactobacillus species and streptococcus species is described. Lactic acid bacteria were cultured in the TCM broth containing 0.5％ glycine and plasmid DNA was isolated from cells treated with mutanolysin by alkaline-detergent lysis method. Good results for releasing and isolating plasmid DNA from lactobacillus species were obtained by treatment of cells with 30$\mu\textrm{g}$ of mutanolysin per ml at 37$^{\circ}C$ for 5 to 10 min. For the streptococcus species, the optimum conditions were slightly different. The procedure could be used for rapid characterization of plasmid DNA in Lactobacillus casei, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus helveticus, Streptococcus lactis, Streptococcus faecalis, Streptococcus faecium, and Streptococcus cremoris strains. Using this procedure, plasmids isolated from $1.5m\ell$ cultures could readily be visualized in agarose gel.

본 연구는 유산간균 및 유산구균으로부터 plasmid DNA를 신속하고 간편하게 분리하기 위한 방법에 관한 것이다. 세포벽 형성 억제 인자인 glycine을 0.5% 첨가한 TCM 배지에서 유산균을 배양하였고 plasmid DNA는 mutanolysin을 처리한 cells로부터 alkaline-detergent lysis 법으로 분리되었다. 유산간균은 효소 처리 때 mutanolysin의 농도를 30$\mu\textrm{g}$/$m\ell$로 하고 37$^{\circ}C$에서 5-10분간 반응되었을 때 plasmid DNA가 아주 잘 추출되었다. 유산구균의 경우는 그 최적 조건이 조금 달랐다. 본 방법은 L. casei, L. acidophilus, L. helveticus, S. lactis, S. faecalis, S. faecium과 S. cremoris 균주로부터 plasmid DNA를 신속하게 분리하는데 사용할 수 있었다. 본 방법을 이용하여 배양액 $1.5m\ell$로부터 분리된 plasmidsDNA가 gel상에서 쉽게 확인될 수 있었다.