Effects of Puromycin and Actinomycin D on the HCG-Induced Expansion of Cumulus Oophorus in vitro

Puromycin과 Actinomycin D가 卵丘細胞의 分散에 미치는 影響

In order to know the mode of the action of gondotrophic hormone on the expansion of cumuli oophori, oocyte-cumulus complexes isolated from Graafian follicles of mice were stimulated to expand in vitro with human chorionic gonadotrophin (HCG), and the effects of puromycin and actinomycin D on the expansion were examined. THe complexes were cultured in medium TC 199 containing 10% bovine serum in the presence or absence of HCG and the inhibitors. Puromycin in the medium (0.5-4 $\\mu$g/ml) suppresseed the HCG-induced cumulus expansion dose-dependently. This effect of puromycin was reversible. Puromycin affected the complexes throughout the HCG-stimulating stage (3 hours) and hyaluronic acid synthesis stage (3-18 hours). Actinomycin D also inhibited the expansion of the cumulus from the concentration of 0.025 $\\mu$g/ml. But the effect of actinomycin D was not completely reversible and the drug appeared to give an irreversible damage to the complexes at 0.1 $\\mu$g/ml. From the above results, it is suggested that RNA or protein synthesis is involved in the process in which HCG stimulates the cumulus cells to expand therefore cAMP elevated by te gonadotrophin may control expansion at the transcriptional or translational level.

哺乳動物의 排卵時 濾胞卵子의 成熟再開와 더불어 卵子를 緻密하게 둘러싸고 있는 卵子細胞들의 分散이 일어난다. 이 現象은 生殖巢刺戟호르몬의 促進을 받은 卵丘細胞들이 細胞間隔에 多量의 뮤코量을 分泌함으로써 이루어지는데 이 때 cAMP가 第二 傳達者로 作用을 한다고 알려져 있다. 본 實驗에서는 卵子-卵丘 複合體를 培養하면서 HCG (10 IU/ml)에 의해 誘導된 卵丘細胞의 分散에 puromycin과 actinomycin D가 미치는 영향을 調査한 바 다음과 같은 缺課를 얻었다. 1. Puromycin은 2 $\\mu$g/ml의 濃度에서 卵丘細胞의 分散을 현저히 抑制하였으며 이 效果는 可逆的이었다. 2. Puromycin의 分散抑制效果는 HCG의 刺戟기간 (3시간) 뿐 아니라 뮤코量의 合成時期 ($3\\sim18$시간)에서도 나타났다. 3. Actinomycin D는 0.025 $\\mu$g/ml의 濃度에서부터 卵丘細胞의 分散을 抑制하기 시작했다. 4. Actinomycin D의 分散抑制效果는 부분적인 可逆性을 나타내었으며 0.1 $\\mu$g/ml의 濃度에서는 非可逆的인 災害效果를 나타내었다. 위의 缺課로부터 HCG의 卵丘細胞 分散誘導過程에는 蛋白質 내지 RNA의 合成過程이 관여하는 것으로 測定되며 따라서 cAMP는 轉寫 내지 解讀水準에서 卵丘細胞의 分散을 調節하는 것 같다.