Trichoderma viride 변이균주 분리를 위한 Cellulase Semiquantitative Plate Assay

Plating Technique for Cellulase Mutants of Trichoderma viride

Trichoderma viride QM 9414의 생육을 저해하여 colony를 형성 시키고 배지에 첨가된 cellulose가 균이 분비한 cellulase에 의해서 분해되어 생긴 clear zone으로서 육안으로 cellulase 역가를 쉽게 측정할 수 있는 방법과 repressor를 첨가하여 constitutive mutant를 선별할 수 있는 방법에 관한 실험을 하였든 바 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 1) Colony를 형성시키고 그 size를 제한 하는데는 deoxycholate를 배지에 0.15％ 첨가 하였을 때 가 가장 좋았다. 2) Saponin을 배지에 0.l％ 첨가하면 뚜렷한 clear zone을 형성하였다. 3) Constitutive mutant를 선별하기 위해서는 기질로 pulp를 사용하였을 경우 glucsoe를 1％ 첨가하거나 glycerol이나 cellobiose를 0.5％ 첨가하면 가능하다고 생각되며 기질로 pure cellulose를 사용하였을 경우는 그대로 배지에 spore를 plating하면 가능하다고 생각된다. 4) Cellulase 역가가 높은 균주는 clear zone의 크기로서 쉽게 분리할 수 있다.

A plating technique was devised to screen for high producing cellulase mutants of Trichoderma viride. The method employs: 1) The use of deoxycholate to limit colony size and 2) saponin to enhance cellulase detection in combiantion with rice straw pulp and pure cellulose on agar plate. The method will be used to isolate constitutive cellulase mutants of Trichoderma viride and should prove useful for isolating high producing mutants from a range of organisms.