Aspergillus nidulans 가 생산하는 Naringinase 관한 연구 (제2보) Naringinase의 정제 및 물리화학적 성질

Studies on the Naringinase Produced by Aspergillus nidulans (Part I) Purification and Characteristics of Naringinase

Aspergillus nidulans로부터 추출한 naringinase를 정제하여 물리화학적 성질을 검토하였다. 1) 효소는 유안침전, DEAE-Sephadex A-25, Sephadex G-100 column chromatography를 사용하여 정제하였으며 정제결과 두 개의 fraction이 나타남을 발견하였고 Fraction I의 비활상 조효소의 781배 종가함을 나타내었다. 2) 효소의 반응 최적 pH와 온도는 위의 두 fraction에서 같은 결과를 나타내었다. 최적 pH는 5.0 이었으며 최적온도는 4$0^{\circ}C$이었다. 3) 조효소액, Fraction I 및 Fraction II의 분해생물은 paper chromatography를 통해 조사한 결과 naringenin, glucose및 rhamnose 임이 밝혀졌다. 4) Andrew의 gel filtration 법에 의한 분자량을 측정한 결과 Fraction I은 약 78,000, Fraction II 는 약 26,000으로 추정되었다. 5) 효소의 안정성에 미치는 pH의 영향은 pH 5.2에서 15분간 처리로 6$0^{\circ}C$에서 50%가 실활되었으며 7$0^{\circ}C$에서는 거의 다 실화되었다. 6) 효소반응에 미치는 금속이온의 영향은 Fe$^{2+}$ 가 약간의 활성을 조해하였을 뿐 별로 영향이 없었다. 7) 효소의 기질에 대한 친화성에서 Km 값이 2.3X$10^{-6}$ g/ml 로 추정되었다

Naringinase extracted from the culture media of Aspergillus nidulans was purified, and the activity was proved to be stronger by 781 fold in the part of precipitation with ammonium sulfate, and column chromatography using DEAE-Sephadex A-25 and Sephadex G-100. Two fractions which had the same enzyme activity were isolated by the purification. Both fractions showed the highest enzymes activity under the reaction conditions of pH 5.0 and 40$^{\circ}C$. Molecular weight of fraction I and fraction II were estimated as 78,000 and 26,000 respectively. This indicated that fraction I would be trimer of fraction II. The enzyme was inhibited by glucose and rhammose, and the Km value was calculated to be 2.3${\times}$ 10$\^$-6/ g/ml.