Chaetomium globosum 이 생성하는 Cellulose 분해 효소에 관한 연구 -(제2보) Cellulase의 정제-

Studies on Cellulolytic Enzyme Producing by Ckaetomium globosum -Part 2. Purification of Cellulase-

1. Cheatomium globosum의 밀기울 배양기에서 조효소를 추출하고 황산암모니움 염석 부분을 cellulose 분말 column으로 2개의 cellulase활성 부분(C-1, C-2)을 분리 하였다. 그 하나는 환원당 증가 활성이 강하며 (C-1) 다른 하나는 곁도 감소 활성이 강하였다. (C-2) 그러나 단백질 량은 C-1부분이 많았고 C-2 부분은 적었다. 2. 환원당 증가 활성이 강한부분 (C-1)을 DEAE-Sephadex A-25 column에서 분리할 결과 다시 2개의 성분 (C-1-1 및 C-1-2)으로 나누어 졌다. 그리고 C-1-2는 column에 강하게 흡착되었고 2M-NaCl의 용액으로 용출되었다. 이는 착색 된 것으로 봐서 C-1-1과는 아주 다른 단백질로 생각이 된다. 3. Cellulase C-1-1을 다시 Amberlite XE-64 column으로 분별하여 단일의 peak를 얻었다. 4. Cellulase C-1-1 부분의 초원심 침강계 면은 단일의 peak로 나타나고 또 자외선 홍수 spectrum도 전형적인 단백질의 흡수 spectrum을 나타 내었다. 5. Cellulase C-1-1의 최적 pH는 환원당 증가활성법으로나 점도 감소 활성법으로 다 같이 pH 4.0이였다. 6. 그리고 그의 최적 온도는 $40^{\circ}C$였다. 7. Cellulase C-1-1의 pH 안정성은 $40^{\circ}C$에서 pH 5.0 내지 pH 8.0의 범위 내였다. 8. 그리고 열안정성은 pH 4.0에서 $50^{\circ}C$ 이하였다

1. Crude cellulase extracted from wheat bran media of Chaetomium globosum with pH 7.0 McIlvaine buffer was fractionated by precipitation with ammonium sulfate and by treatment with the cellulose powder, DEAE-Sephadex A-25 and Amberite XE-65 (IRC-50) column chromatography. 2. Consquently two cellulases C-1 and C-2 were obtained by cellulose column chromatography. Cellulose C-1 was a powerful CMC-saccharifying and CMC-liquefying activity but cellulose C-2 was stronger CMC-liquefying activity compared to CMC-saccharifying activity and cellulase C-2 had smaller protein than that of cellulose C-1. And cellulose C-2 was fractionated by DEAE-Sephadex A-25 column chromatography into cellulase C-1-1 and cellulose C-1-2. 3. It can be obtained, therefore, that cellulose produced Chaelomium globosum consisted, at least, of three cellulases C-2, C-1-1 and C-1-2. 4. Cellulose C-1-1 was homogenous in the ultraviolet and the ultracentrifuge pattern. And cellulose C-1-1 had enzyme for CMC-saccharifying activity. 5. The optimum pH for the enzyme activity of cellulose C-1-1 was 4.0 in any methods of meas urement reducing sugar and viscosity. The optimum temperature was $40^{\circ}C$ in any methods. 6. The pH stability of cellulase C-1-1 was within pH 5.0 to pH 6.0 at $40^{\circ}C$ and fairly stable in acidic solution. 7. The heat stability was below $50^{\circ}C$ at pH 4.0 and complete heat inactivation of this cellulase occurred at $70^{\circ}C$.