THIN LAYER CHROMATOGRAPHIC SEPARATION OF LEAF XANTHOPHYLLS

THIN LAYER CHROMATOGRAPHY 에 의한 CAROTENOID의 분석

The resolving capacities of xanthophyll pigments on thin-layers of Silica Gel, Hyflo super-Cel, and Micro-Cel C with varying concentrations of acetone in petroleum ether as the developing solvent were compared. The results showed that the resolving capacity of Micro-Cel C thin-layer was superior to others and satisfactory for the separation of leaf carotenoids in clearly separated six bands; carotenes, lutein-zeaxanthin, antheraxanthin, violaxanthin, an unidentified band, and neoxanthin, when it was developed with $13\%$ acetone-petroleum ether solution for 15 to 20minutes in an unsaturated chamber. Adhension of Micro-Cel C to glass was adequate without binder. Calcium sulfate used as a binder appeared to inactivate the resolving capacity of Micro-Cel C. Removing an about 0.2cm-wide layer on bo side of thin-layer slide helped to prevent 'edge effect' which gave tailing and faster solvent ascending along the side than the center. An adequate thickness of thin-layer was obtained when a 3 ml aliquot of the suspension in which l0g powdered Micro-Cel C was suspended in 75 ml distilled water was coated on a $2\times20cm$ glass slide.

Silica Gel, Hyflo super-Cel, 및 Micro-Cel C 박층을 이용한 xanthophyll 분리를 위한 chromatography의 실험결과를 요약하면 1) 색소분리능력은 Micro-Cel C 박층이 가장 좋고 Silica Gel 박층에서도 만족할만한 하였다. 그러나 Silica Gel 박층은 자체의 산성때문에 조작중 epoxy xanthophyll의 furanoid 이성화를 초래하였다. 2) $CaSO_4$ 등의 binder는 접착보조효과 보다는 오히려 분리능력을 방해하였다. 3) 전개조건은 차광하의 불포화용기내에서 $15\~20$분간의 전개에 $13\%$ acetone-petroleum ether 용매를 쓰는 것이 적당하였다. 4) Band의 형상 및 trailing을 정상화하는데는 양편 가장자리의 박층을 $0.2\~0.3cm$ 폭으로 제거하는 것이 효과적 이였다. 5) 박층의 두께는 10g의 Micro-Cel C 분말을 75ml의 증유수에 현탁시켜 그중 3ml 취하여 한개의 $2\times20cm$ glass slide에 도포한것이 적당하였다. 7) 이상의 결과에서 Micro-Cel C thin-layer는 미량의 시료로서 단시간내에 빠른 조작으로 artifact 생성없이 xanthophyll을 분리 할 수 있고 band는 손쉽게 긁어내어 흡광도법에 의해 정량적인 목적에도 이용할 수 있었다.