Cloning of hexavalent chromium reductase gene from E.coli ATCC 33456

E.coli ATCC 33456 has relatively higher activity of Cr(VI) reduction than other microorganism. The purpose of this research is cloning of Cr(V) reductase from E.coli ATCC 33456. Using colony and southern hybridization, we selected two condidates. Among candidates, pNCR9 is higher Cr(VI) reduction activity than E.coli ATCC 33456. Purified Cr(VI) reductase antibody was reacted at estimated 42Kda protein band of candidate's crude extract on 12% SDS-PAGE. This results showed cloned gene's product is very similar to purified Cr(VI) reductase from E.coli ATCC 33456.

E.coli ATCC 33456은 6가 크롬 환원능이 있다고 보고되어진 미생물보다 비교적 높은 활성을 지닌다. E.coli ATCC 33456에서 6가 크롬 환원효소를 클로닝하기 위해서 colony hybridization과 southern hybridization을 통하여 2개의 형질 전환 균주를 획득할 수 있었다. 두 균주 모두 E.coli ATCC 33456이 가진 6가 크롬 환원능보다 약 2.5-4배정도 높은 활성을 보였으며, 두 균주의 조효소액을 가지고 immuno-blotting을 실시한 결과, E.coli ATCC 33456에서 분리 정제된 6가 크롬 환원효소의 항체가 약 42Kda에서 반응하는 것을 확인할 수 있었으며, 이 결과는 분리 정제된 6가 크롬 환원효소와 매우 유사한 유전자 산물이 두 균주에서 나온다는 것을 보여주었다.