Angelica gigas Nakai 현탁세포 배양의 동결보존 연구

Cell culture of Angelica gigas Nakai producing decursin and decursinol angelate as secondary metabolites were preserved in liquid nitrogen after pre-freezing in deep $freezer(-70^{\circ}C)$. The development of optimal procedure for cryopreservation was investigated by using cryoprotectant and pre-treatment before cooling. 0.7 M sucrose was found be the optimum osmotic pre-conditioning culture medium compared to mannitol, sorbitol and NaCl with the same osmotic pressure. In pre-culture medium, cells in exponential phase, supported the best growth after cryopreservation. Effective cryoprotectant was proved to be a mixture of sucrose, glycerol, DMSO. Higher concentration of cryoprotectant was better for cell viability. The highest relative cell viability established after the development of optimal procedure was 65%.

식물세포의 장기보존방법 연구를 위하여 참당귀(Angelica gigas Nakai) 현탁세포를 이용하여 동결보존을 수행하였다. 최적의 예비성장배지로는 0.7 M sucrose를 첨가하여 6일간 배양한 것이 가장 좋았으며, 동결보호제로는 1 M sucrose, 1 M glycerol, 1 M DMSO를 혼합하여 사용하였을 때 가장 좋은 결과를 나타내었다. 동결 시에는 처음 8시간 동안 deep freezer에서 천천히 냉동을 한 후 액체질소에 넣는 것이 가장 좋은 것으로 나타났다. 또한 여러 가지 삼투압 증진제를 사용한 실험을 수행한 결과 sucrose가 가장 좋은 결과를 나타내었는데 이것은 sucrose가 삼투압 증진제 역할뿐만 아니라 cell membrane을 보호하기 때문으로 사료된다.