여러 종류의 동해방지제를 이용한 소 체외수정란의 동결 및 일단계 융해후의 체외배양 생존율 및 수태율

치밀 난구세포로 둘러싸인 소 난자를 $38^{circ}C$. 5% $CO_2$ 배양기에시 5% superovulated cow serum(SCS)이 첨가된 m-TCM 199 medium 으로 $20{\sim}22$ 시간 배양하였으며, 수정능이 획득된 정자와 체외수정하였다. 7일${\sim}$8일경의 수정란을 1.3M methyl cellosolve(MC), 1.1M diethylene glycol(DEG), 1.8M ethylene glycol(EG), 1.6M propylene glycol(PG) 및 1.1M 1,3-butylene glycol(BG) 용액에서 10분간 평형시킨 후 0.25 ml 스트로내에 장전하였다. 스트로를 $0^{\circ}C$의 alcohol bath freezer에 넣고 $-6^{\circ}C$까지 $-1^{\circ}C$/분 속도로 냉각, 식빙 후 10분간 정체시켰으며, $-0.3^{\circ}C$/분 또는 $-0.5^{\circ}C$/분으로 $-30^{\circ}C$까지 냉각 후 스트로를 액체질소에 침지하여 보관하였다. 수정란이 들어있는 스트로를 $30^{\circ}C$ 온수에서 융해하였으며, 수정란을 TCM 199 medium 으로 옮긴 후 5% SCS가 첨가된 TCM 199 medium 에서 48시간 배양하였다. 수정란이 양호한 형태를 유지하며 나중의 발육단계로 진행된 것을 생존한 것으로 간주하였다. 각 종류의 동해방지제에서 동결된 수정란의 일부는 융해 후 동해방지제를 제거하지 않고 직접 비외과적으로 이식하였다. 동결-융해 후 동해방지제의 종류에 따른 탈출배반포 발달율은 EG 50.0%, MC 53.6%, DEG 56.9%, PG 58.0% 그리고 BG 11.5%였다. $-0.3^{\circ}C$/분 또는 $-0.5^{\circ}C$/분 으로 냉각한 수정란의 생존율은 두 그룹간에 유의적인 차이가 없었으나 (P<0.05), 탈출배반포 발달율은 -0.5분 $^{\circ}C$/분(22.6%, 12/53)보다 $-0.3^{\circ}C$/분(64.6%, 31/48) 냉각시에 유의적으로 높았다(P<0.01). 동해방지제의 종류에 따른 수정란의 수태율은 MC 48%(10/21). DEG 30%(3/10), EG 74%(20/27) 및 PG 40%(4/10) 였다. 이러한 결과로 보아 MC, DEG, EG 그리고 PG는 소의 체외수정란의 동결을 위한 동해방지제로서 이용될 수 있음을 보여주었다.