Purification of Nitric Oxide Synthase from Bovine Pancreas

Nitric Oxide Synthase(NO synthase: EC.1.14.13.39)는 생체내에서 L-arginine을 기질로 하여 nitric oxide(NO)와 L-citrulline의 생성을 매개하는 효소로서 뇌, 간장, 신장, 체장등 대부분의 주요장기와 근육세포, 신경세포 등 거의 모든 조직에 분포하고 있다. NO synthase에 의해 생성되는 NO는 혈관이완작용, 신경전달 물질로서의 작용, 면역 담당세포에서의 세포 독작용 등 많은 생리현상에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 특히 체장에서는 췌외분비 기능의 항진에 있어 세포내 cGMP level의 변동이 NO와 연관된다는 사실에 주목하고 있으며 본연구실에서도 이에 관한 연구가 진행중이다. 따라서 본 연구에서는 소 췌조직의 100,000$\times$g cytosol을 효소원으로 하여 다음과 같이 NO synthase의 분리, 정제를 시행하였다. Ammonium sulfate로 30%(176g solid ammonium sulfate/$\ell$) 포화, 침전 후 2',5'-ADP agarose 및 calmodulin-agarose affinity chromatography를 연속적으로 시행하여 NO synthase를 분리하였으며 electrophoresis상에서 약 160kd의 분자량을 나타내었다.